南宫28NG相信品牌力量致力于生物医药领域，为生物细胞培养提供详细指导和建议。本文将对此进行分步骤的介绍。

培养条件

本细胞系来源于58岁白人男性肺癌组织，培养条件如下：

• 气相：95%空气 + 5%二氧化碳
• 温度：37℃
• 培养基：F12K + 10% FBS + 1% P/S

传代方法

细胞传代的基本原则为：

• 第一次传代建议比例为1:2。
• 在细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管，留5ml完全培养基继续培养。
• 细胞密度若超过80%，可及时进行传代。

传代步骤

细胞传代方法

1. 在细胞传代前，用PBS缓冲液清洗细胞1-2次，弃去培养上清。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。
3. 当细胞大部分变圆并脱落时，添加5ml完全培养基终止消化。
4. 轻轻吹打，使细胞完全脱落后转移至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养基重悬。
5. 按1:2的比例进行分瓶传代，补充完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

细胞冻存与复苏

细胞生长至覆盖培养瓶80%时，可进行冻存处理：

1. 加入0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后，用完全培养基终止消化，并转移至离心管中。
2. 離心后，用雅吉生物无血清冻存液重悬细胞，混匀后加入冻存管中。
3. 将冻存细胞放入-80℃冰箱中，如果需要转入液氮罐，需在-80℃存放24小时再转入。

南宫28NG相信品牌力量将继续为生物医药行业提供高效、优质的服务，确保细胞培养的质量和安全。

注意事项

在细胞运输过程中，如果遇到细胞脱落现象，属于正常情况。若脱落较多，建议收集培养液，进行适当的补充和处理，确保细胞的健康生长。