猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品信息

产品名称：猪瘟病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：Test Kit for Antibodies to Classical Swine Fever Virus (ELISA)

包装规格

本产品提供以下规格：
- 96T × 1/盒
- 96T × 2/盒
- 96T × 5/盒

预期用途

猪瘟由猪瘟病毒（Classical Swine Fever Virus, CSFV）引起，是一种高度接触性、出血性和致死性的传染病，其临床特征包括高热和广泛出血、坏死及梗塞等症状。该试剂盒可用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，并用于评估猪瘟病毒疫苗的免疫效果。

原理

本试剂盒包含预包被猪瘟病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，采用酶联免疫法（ELISA）原理对猪血清和血浆样本中的抗体进行检测。实验时，加入对照血清和待检样本，若样品中含有猪瘟病毒抗体，将与酶标板上的抗原结合。随后通过洗涤去除未结合成分，再加入酶标记物，与抗原抗体结合，最后通过与底物反应生成蓝色产物，蓝色深浅与样本中的抗体含量呈正相关。

储存及有效期

本试剂盒在2～8℃条件下保存，有效期为12个月。开封后的板需避光保存，并尽量在2个月内使用完。

适用仪器

本试剂盒适用于配备450nm和630nm波长的酶标仪，以及37℃恒温设备和可调微量移液器。

样品准备

1. 取动物全血，按常规方法制备血清，要求清亮无溶血和污染。样品可在2～8℃下保存一周，长期需放置在-20℃条件下。
2. 使用样品稀释液将待检血清按照40倍比例稀释（例如5μl血清加入195μl稀释液）。
3. 使用前，浓缩洗涤液应恢复至室温并用蒸馏水或去离子水稀释至工作洗涤液（例如19份水加1份浓缩洗涤液）。

检验方法

1. 使用前将试剂盒放置室温30分钟以恢复温度。
2. 取所需酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未用的板条需尽快密封并保存于2～8℃。
3. 向阴性和阳性对照孔各加入100μl相应对照，样品孔加入100μl稀释后的样品。
4. 混匀后，加盖并在37℃（推荐水浴）避光反应30分钟。
5. 弃去孔内液体，加入350μl工作洗涤液，静置30秒后重复洗涤5次，最后一次拍干。
6. 向每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板，在37℃避光反应30分钟。
7. 重复洗涤步骤。
8. 向每孔依次加入底物液A和底物液B各50μl，混匀后反应10分钟。
9. 加入50μl终止液，混匀并在450nm波长下测定各孔的吸光值。

参考值与判定

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值应≤0.3，阳性对照的平均OD值应≥0.6。样品的OD值用于计算SP值，SP值≥0.2判定为阳性，SP值＜0.2判定为阴性，若为阴性，建议对猪只进行相应疫苗补打。

注意事项

1. 实验操作时应佩戴手套和工作服，遵守消毒隔离制度。
2. 终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤，如不慎接触需立即用水冲洗。
3. 从冷藏环境中取出的酶标板须恢复至室温再开封，未用完的需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4. 在低温时，浓缩洗涤液易结晶，使用前应恢复至室温。
5. 检测样品应保持新鲜，结果判定以酶标仪读数为准。
6. 不同批号的试剂组件不得混用。

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