南宫28NG相信品牌力量，提供RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞的专业培养指导，确保实验的顺利进行。

一、细胞培养条件

细胞名称： RIN-14B大鼠胰岛素瘤细胞

生长特性： 贴壁生长

冻存条件： 无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系： 1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法： 推荐首次传代比例为1:2，传代后的液体每2天更换一次。

备注： 可采用无菌离心管收集培养基样本用于对比，如果效果不佳，建议选用南宫品牌的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后，尽快培养至良好状态，填满完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的安全有效。处理步骤如下：

1. 使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后放入超净工作台进行无菌操作。静置于37℃、5% CO2培养箱中3-4小时，以稳定细胞状态。
2. 通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片将作为关键的售后依据，如未提供则默认为状态良好。
3. 传代过程中，可分别使用原瓶的完全培养基和自配基质以便进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管，保留5ml基质，放入培养箱中；若超80%，则进行如下步骤：

1. 弃去培养基，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA），在37℃下消化1-2分钟，观察细胞状态。一旦细胞大部分变圆并脱落，迅速加5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落，然后吸出悬液并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃上清，重悬于1-2ml完全培养基。
4. 按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至瓶内覆盖面积80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶，待细胞缩圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打后转移至离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，将细胞沉淀与1ml无血清冻存液（货号：C7001）混匀后装入冻存管。
4. 冻存细胞可直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐需先在-80℃存放24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，在37℃水浴中快速解冻，直至无结晶后对冻存管外壁进行酒精消毒。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的离心管，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，并放入细胞培养箱中。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基，继续培养。

四、注意事项

运输过程中，细胞脱落属于正常现象。处理时可将培养液收集至离心管，进行快速离心和重悬，再进行传代。

五、售后条款

1）重发条件

1. 运输途中出现问题，例如细胞丢失、瓶身破损等，需重发。
2. 如细胞在收到后48小时内出现污染，且能够提供实验结果，确认后重发。
3. 未能存活的细胞需提供清晰的状态照片，经过验证后重发。
4. 细胞在指定时间内出现问题，需提供相关照片及操作记录，经过技术人员的验证将决定责任归属。

2）不予重发的情况

1. 因客户操作不当造成的细胞污染。
2. 非推荐培养基导致细胞状态不良。
3. 未及时提出问题或未提供相关照片的。

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