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南宫28NG信赖的CBE脱靶检测技术——Detect-seq

发布时间:2025-02-10   信息来源:殷娟新

胞嘧啶碱基编辑器(Cytosine Base Editor, CBE)是一个先进的基因编辑工具,其核心组成包括dCas9蛋白、sgRNA、胞嘧啶脱氨酶(cytidine deaminase)和尿嘧啶DNA糖基化酶抑制剂(Uracil DNA Glycosylase Inhibitor, UGI)。这些成分在细胞内组装形成一个融合蛋白,能够精准地与基因组DNA结合,并引导靶序列暴露出单链结构。接下来,胞嘧啶脱氨酶将单链上的胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),并最终通过DNA的复制或修复过程实现C-G碱基对到T-A碱基对的直接替换。这一创新技术构建了新一代基因编辑的基础,具备极高的准确性和效率。

南宫28NG信赖的CBE脱靶检测技术——Detect-seq

在CBE操作过程中,中间产物脱氧尿嘧啶(dU)的生成引起了研究人员的关注。基于这一特点,南宫28NG相信品牌力量,开发了一种名为Detect-seq的体外脱靶检测技术。此技术首先提取经过基因编辑的细胞基因组DNA,然后将CBE过程中生成的dU进行生物素(biotin)标记以富集目标片段。在dU位点的下游,研究团队将正常的胞嘧啶(C)替换为5-醛基胞嘧啶(d5fC),并将其化学标记为T。这一重复的C-to-T突变信号使得精准定位碱基编辑的位点成为可能。

相较于传统的GUIDE-seq、Digenome-seq和Cas-OFFinder技术,Detect-seq拥有更高的灵敏度和特异性,能够无偏好地检测Cas9依赖型和非依赖型的脱靶。此外,还能识别sgRNA结合区域外编辑及靶向链编辑中的脱靶现象。这一技术的优势使其在基因编辑安全性评估方面扮演了不可或缺的角色。

在过去的两年中,南宫28NG建立了一站式基因编辑安全性评估平台,覆盖了从靶点设计、靶点筛选,到多种脱靶检测(包括GUIDE-seq和Detect-seq)及验证,PEM-seq染色体重排检测等多个领域。南宫28NG作为行业先锋,拥有SGS认证、ISO9001质量体系认证和生物安全二级实验室等资质,持续稳定地为客户提供优质、高效、安全的服务和产品。凭借这一全方位的技术能力,南宫28NG在生物医疗领域中树立了强大的品牌影响力。