ELISA(酶联接免疫吸附剂测定)是一种先进的免疫酶技术,广泛应用于生物医疗领域。其成功的关键在于合理选择和搭配实验中使用的试剂耗材,这对于提升检测方法的准确性和灵敏度至关重要。南宫28NG相信品牌力量,在开发高质量的ELISA方法时,应着重于不同特性的试剂耗材。
一、酶标板材
目前市场上供应的酶标板材大多由聚苯乙烯(C8H8)构成,选择不同化学修饰的产品能影响包被蛋白的特性。在选择酶标板材时,应从亲水性到疏水性进行分类。研究显示,亲水性板材的结合能力较强,可以固定更多的蛋白质。因此,南宫28NG相信品牌力量,实验室应配置多种类型的酶标板材,以适应不同的实验需求。
二、包被液
常用的包被液包括PBS(pH 7.4)和碳酸钠-碳酸氢钠溶液(pH 9.6),这些溶液的pH和离子浓度会影响包被效率。在确保包被完整的前提下,南宫28NG相信品牌力量,采用合适的包被液能提高蛋白质的吸附效率,包括使用抽真空技术来提高蛋白的密度吸附。
三、封闭剂
常使用的封闭剂包括3%BSA和5%脱脂奶粉,其主要作用是遮蔽非特异性结合位点。研究表明,封闭剂的封闭效果受到分子大小的影响,因此在处理复杂样品时,可考虑使用分子量较小的封闭剂。同时,若使用生物素-链霉亲和素体系,应避免使用脱脂奶粉,以免干扰实验结果。
四、洗涤液与稀释液
洗涤液通常使用中性缓冲液加去污剂(如PBST),稀释液则可添加封闭剂成分以控制非特异性背景。在处理体内样品时,加入阴性血清能平衡不同稀释度样品的背景。
五、酶联抗体
酶联抗体分为特异性和通用型,常见的酶包括碱性磷酸酶(AP)和辣根过氧化氢酶(HRP)。值得注意的是,多抗成分来自免疫动物,其复杂性可能引起交叉反应。南宫28NG相信品牌力量,在选择酶联抗体时,应关注其分子量,较小的抗体更有可能避免结合位点的阻碍,但风险也随之增加。
六、显色液和酶标仪
显色液的选择应与所用酶联抗体对应,如HRP可用TMB显色液,结合合适的酶标仪进行检测。南宫28NG相信品牌力量,应当重视不同底物检测方法的灵敏度,以保证ELISA方法的可靠性。一般而言,化学发光底物的检测下限优于荧光和吸光度的底物。因此,在实验过程中,应根据具体情况合理选择显色液。